. Boletin de la Sociedad de Biología de Concepción. Sociedad de Biología de Concepción; Biology; Biology. Bol, Soc. Biol. Concepción, Chile. Tomo 66, 1995 Sacrificio de las larvas, confección de frotis, coloración y lectura Al momento del sacrificio, las larvas se aneste- siaron por inmersión en una solución acuosa de mentol (2 g/1). Después de lavadas, cada larva se dispuso sobre la platina de una lupa binocular; con la ayuda de pinzas finas, se hizo una incisión en la piel a nivel del tórax, dejando a la vista el músculo cardíaco. La punta de una micropipeta de aproxima- damente 100 micrones
. Boletin de la Sociedad de Biología de Concepción. Sociedad de Biología de Concepción; Biology; Biology. Bol, Soc. Biol. Concepción, Chile. Tomo 66, 1995 Sacrificio de las larvas, confección de frotis, coloración y lectura Al momento del sacrificio, las larvas se aneste- siaron por inmersión en una solución acuosa de mentol (2 g/1). Después de lavadas, cada larva se dispuso sobre la platina de una lupa binocular; con la ayuda de pinzas finas, se hizo una incisión en la piel a nivel del tórax, dejando a la vista el músculo cardíaco. La punta de una micropipeta de aproxima- damente 100 micrones de diámetro, previamente heparinizada, fue introducida en el ventrículo. Al otro extremo de la pipeta se adosó con anterioridad una fina goma aspirante lo que permitió al experi- mentador hacer subir la sangre. El hecho de perfo- rar el ventrículo no impide que el corazón continúe latiendo, lo que, al mismo tiempo, facilita la ascen- sión de este tejido por la micropipeta. La gota de sangre obtenida se depositó en el extremo de una lámina histológica desgrasada y seca, una fina capa de ella se extiende a lo largo de toda la lámina, de acuerdo a la técnica clásica de preparación de un frotis sanguíneo. Una vez realiza- do el frotis, éste es inmediatamente secado por medio de un flujo de aire. Posteriormente, las lámi- nas se fijaron mediante inmersión en etanol puro durante un mínimo de tres minutos; luego, fueron coloreadas durante 10 minutos en una solución Giemsa al 4% en buffer fosfato de pH 6,8. Posterior-. FiGURA 3. La flecha muestra la presencia de un MN inducido por uno de los efluentes industriales, en un eritrocito de C. ccnidiverbera. mente, las láminas se lavaron, sumergiéndolas dos o tres veces sucesivas en agua destilada. Por último, se dejaron escurrir y secar lentamente al aire. En estas condiciones, las láminas se pueden conservar durante varios meses siempre que se mantengan al abrigo del polvo y de la luz. Para la lectur
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